细胞毒性检测

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检测范围

细胞毒性检测适用于评估化学物质、药物、医疗器械、化妆品原料及生物材料等对哺乳动物细胞的毒性作用。具体检测对象包括：

1. 药物开发：筛选候选化合物的细胞毒性，优化药物安全性。
2. 医疗器械：评估植入材料或医疗器具的细胞相容性（如ISO 10993-5标准）。
3. 工业化学品：检测工业原料或产品对细胞的潜在危害。
4. 环境污染物：分析重金属、农药等环境因子的毒性效应。
5. 化妆品及日化产品：确保成分符合《化妆品安全技术规范》要求。

检测项目

1. 细胞存活率：通过MTT/XTT法、CCK-8法检测线粒体活性，反映细胞增殖抑制或死亡情况。
2. 细胞膜完整性：采用乳酸脱氢酶（LDH）释放实验，评估细胞膜损伤程度。
3. 细胞凋亡与坏死：通过流式细胞术（Annexin V/PI双染）区分凋亡与坏死细胞比例。
4. 氧化应激水平：检测活性氧（ROS）、超氧化物歧化酶（SOD）等指标，分析毒性机制。
5. 细胞形态学观察：利用倒置显微镜或荧光染色（如Hoechst 33342）观察细胞结构变化。
6. 细胞周期阻滞：通过PI染色结合流式细胞术分析毒性物质对细胞周期的影响。

检测仪器

1. 酶标仪（如BioTek Synergy H1）：用于吸光度（OD值）检测，支持MTT、CCK-8、LDH等实验。
2. 流式细胞仪（如BD FACSCalibur）：分析细胞凋亡、周期及ROS水平。
3. 倒置荧光显微镜（如Nikon Eclipse Ti）：观察细胞形态及荧光标记结果。
4. 离心机与细胞培养箱：维持细胞培养条件（37℃、5% CO₂）及样品处理。
5. 实时细胞分析仪（如ACEA xCELLigence）：动态监测细胞增殖与毒性效应。

检测方法

1. MTT法

   • 原理：活细胞线粒体酶将MTT还原为紫色结晶甲瓒，溶解后通过OD值定量细胞活性。
   • 步骤：接种细胞→加药处理→加入MTT孵育→溶解甲瓒→酶标仪检测570 nm吸光度。
   • 应用：快速筛选药物或化合物的半数抑制浓度（IC50）。

2. LDH释放实验

   • 原理：细胞膜损伤后，胞内LDH释放至培养液，催化底物生成红色甲臜，检测490 nm吸光度。
   • 步骤：收集培养上清→加入LDH检测试剂→避光反应→酶标仪定量。
   • 应用：评估急性细胞膜损伤（如纳米材料毒性）。

3. Annexin V-FITC/PI双染法

   • 原理：Annexin V结合凋亡细胞膜外翻的磷脂酰丝氨酸，PI标记坏死细胞的破损膜。
   • 步骤：收集细胞→染色→流式细胞仪分析荧光信号。
   • 应用：区分凋亡与坏死，研究毒性作用机制。

4. 实时细胞分析（RTCA）

   • 原理：通过微电极阻抗动态监测细胞贴壁生长状态，反映毒性引起的增殖抑制。
   • 步骤：接种细胞于E-Plate→加药处理→系统自动记录细胞指数（CI值）。
   • 应用：无标记、实时追踪毒性效应（如医疗器械浸提液测试）。

注意：因业务调整，暂不接受个人委托测试望见谅。