肥胖小鼠模型检测

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检测范围 本研究针对高脂饮食诱导的肥胖小鼠模型，检测范围涵盖生理指标、代谢参数、组织病理学及分子生物学变化。实验对象为8周龄C57BL/6J雄性小鼠，分为正常对照组（普通饲料）和肥胖模型组（60%脂肪供能高脂饲料），干预周期为12周。检测范围包括全身性肥胖表征、糖脂代谢紊乱、肝脏脂肪沉积、炎症因子表达及关键代谢基因调控水平。

检测项目

1. 生理指标：体重增长率、体脂率（皮下及内脏脂肪重量）、摄食量、能量消耗。
2. 代谢参数：空腹血糖（FBG）、口服糖耐量（OGTT）、胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）、血清总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白（LDL-C）及高密度脂蛋白（HDL-C）。
3. 组织病理学：肝脏组织苏木精-伊红（H&E）染色观察脂肪变性，油红O染色定量脂滴面积；脂肪组织切片分析脂肪细胞大小及炎症浸润。
4. 分子生物学：血清炎症因子（TNF-α、IL-6）浓度、肝脏PPAR-γ、SREBP-1c基因mRNA表达水平及AMPK蛋白磷酸化状态。

检测仪器

1. 生理指标：电子精密天平（Sartorius CP224C，精度0.1 mg）测量体重；小动物核磁共振体成分分析仪（EchoMRI-100H）定量体脂率。
2. 代谢参数：便携式血糖仪（Accu-Chek Performa）检测血糖；全自动生化分析仪（Hitachi 7080）分析血脂；酶标仪（BioTek Synergy H1）测定胰岛素（ELISA试剂盒，Cusabio）。
3. 组织病理学：石蜡切片机（Leica RM2235）制备组织切片；光学显微镜（Nikon Eclipse E100）及图像分析软件（Image-Pro Plus 6.0）定量病理变化。
4. 分子生物学：实时荧光定量PCR仪（Applied Biosystems QuantStudio 5）检测基因表达；Western blot系统（Bio-Rad ChemiDoc MP）分析蛋白表达。

检测方法

1. 生理与代谢参数：

   • 每周固定时间称量体重，计算体重增长率（%）；干预结束后禁食12小时，尾静脉采血测定FBG及OGTT（葡萄糖2 g/kg灌胃，0/30/60/120 min采血）。
   • 血清分离后，采用氧化酶法（TC、TG）、直接测定法（LDL-C、HDL-C）完成血脂检测；HOMA-IR公式为（空腹胰岛素×空腹血糖）/22.5。

2. 组织病理学分析：

   • 肝脏及附睾脂肪组织经4%多聚甲醛固定48小时后石蜡包埋，切片厚度5 μm，H&E染色观察结构，油红O染色（异丙醇溶解，60%乙醇分化）定量脂滴面积占比。
   • 脂肪细胞直径通过Image-Pro Plus随机测量100个细胞，取平均值。

3. 分子生物学检测：

   • 实时荧光定量PCR：TRIzol法提取肝脏总RNA，逆转录为cDNA后，SYBR Green法扩增PPAR-γ、SREBP-1c及内参基因β-actin，2^-ΔΔCt法计算相对表达量。
   • Western blot：RIPA裂解液提取肝脏蛋白，SDS-PAGE电泳后转膜，5%脱脂牛奶封闭，一抗（AMPK、p-AMPK，CST公司）4℃孵育过夜，HRP标记二抗显影，Image Lab软件分析灰度值。
   • 血清炎症因子：采用双抗体夹心ELISA法，标准品浓度梯度稀释，450 nm波长测定吸光度，四参数拟合计算TNF-α、IL-6浓度。

注意：因业务调整，暂不接受个人委托测试望见谅。