两代繁殖毒性检测

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两代繁殖毒性检测技术规范

1. 检测范围 两代繁殖毒性检测主要针对化学物质、药物、农药及工业原料对哺乳动物生殖系统的潜在危害。实验对象通常选用健康性成熟的Sprague-Dawley（SD）大鼠，覆盖亲代（F0代）和子代（F1代），暴露途径以经口灌胃为主，检测周期包括交配前（至少70天）、妊娠期、哺乳期及子代从出生至性成熟的完整发育阶段。

2. 检测项目 （1）生殖系统指标：亲代与子代生殖器官（睾丸、卵巢、附睾、子宫）的脏器系数、组织病理学变化； （2）繁殖功能：交配行为、受孕率、妊娠周期、产仔数、幼崽存活率及哺乳能力； （3）子代发育：出生体重、性别比例、睁眼时间、断乳体重、性成熟时间及神经行为发育； （4）内分泌干扰：血清性激素（睾酮、雌二醇、促卵泡激素、黄体生成素）水平检测； （5）精子质量：精子密度、活率、形态学异常率及运动能力分析。

3. 检测仪器 （1）组织病理学分析：全自动石蜡切片机（Leica RM2235）、光学显微镜（Olympus BX53）及图像分析系统（Image-Pro Plus）； （2）激素检测：酶联免疫吸附测定仪（ELISA，BioTek Synergy H1）、化学发光免疫分析仪（Abbott ARCHITECT i2000SR）； （3）精子分析：计算机辅助精子分析系统（CASA，Hamilton Thorne IVOS II）； （4）生理监测：电子天平（METTLER TOLEDO ME204）、动物行为视频跟踪系统（EthoVision XT 15）； （5）环境控制：SPF级动物饲养系统（温度22±2℃，湿度50±10%，12h光暗循环）。

4. 检测方法 （1）实验设计：按OECD 416或EPA OPPTS 870.3800标准，设置溶剂对照组、低/中/高剂量组，每组至少20对亲代； （2）样本采集：解剖获取生殖器官称重后固定于4%多聚甲醛，制备HE染色切片；血清样本经离心（3000rpm，15min）后-80℃保存； （3）数据采集：妊娠第20天剖检记录着床数、吸收胎及死胎；幼崽出生后每日记录存活率及体重，断乳后筛选F1代进行第二代繁殖实验； （4）分析方法：精子悬液经1%伊红染色后CASA系统分析200个精子/样本；激素水平采用双抗体夹心法测定，标准曲线R²＞0.99； （5）统计学处理：应用SPSS 26.0进行单因素方差分析（ANOVA），生殖率数据经反正弦转换，显著性水平设定为p＜0.05。

注意：因业务调整，暂不接受个人委托测试望见谅。