药物遗传毒性检测

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检测范围

药物遗传毒性检测适用于所有在研或已上市药物的安全性评估，涵盖化学小分子、生物制剂、天然产物及其代谢产物。检测范围包括药物对DNA的直接损伤（如断裂、交联）、基因突变、染色体结构或数量异常等遗传物质改变的风险。此外，该检测需覆盖药物的不同开发阶段（临床前研究、临床试验、上市后监测），并遵循国际监管机构（如FDA、EMA、ICH）的指导原则（如ICH S2R1）。

检测项目

1. 细菌回复突变试验（Ames试验）：评估药物诱导细菌基因突变的能力，常用鼠伤寒沙门氏菌（TA98、TA100等菌株）和大肠杆菌。
2. 体外哺乳动物细胞染色体畸变试验：检测药物引起哺乳动物细胞（如CHO细胞、人外周血淋巴细胞）染色体断裂、缺失或重排的风险。
3. 微核试验：通过体内（如小鼠骨髓）或体外（如TK6细胞）模型，分析药物诱导微核形成（染色体断裂或纺锤体损伤的标志）。
4. 基因突变试验（如MLA试验）：利用小鼠淋巴瘤细胞（L5178Y）评估药物导致特定基因座（如TK基因）突变的潜力。
5. 彗星试验（单细胞凝胶电泳）：检测药物引起的DNA单链或双链断裂。
6. 转基因动物模型（如MutaMouse或Big Blue）：用于体内基因突变频率的定量分析。

检测仪器

1. 荧光显微镜与成像系统：用于染色体畸变、微核及彗星试验的细胞样本观察与图像分析。
2. 流式细胞仪：高通量检测微核形成、细胞周期阻滞及DNA含量异常。
3. 实时定量PCR仪与高通量测序仪：分析基因突变、DNA损伤修复相关基因表达及全基因组突变谱。
4. 全自动酶标仪：用于高通量Ames试验的菌落计数及细胞毒性评估。
5. 液相色谱-质谱联用仪（LC-MS/MS）：检测药物代谢产物的遗传毒性潜力。
6. 细胞培养与代谢活化系统：包括S9肝微粒体混合物，模拟体内代谢环境。

检测方法

1. 细菌回复突变试验（Ames试验）

   • 步骤：将药物与特定菌株（含组氨酸缺陷型突变）及S9代谢活化系统共孵育，涂布于最低葡萄糖琼脂平板，48小时后计数回复突变菌落。
   • 判定标准：剂量依赖性菌落数增加（≥2倍阴性对照）为阳性。

2. 染色体畸变试验

   • 体外法：药物处理对数生长期细胞（如CHO细胞）24-48小时，加入秋水仙素阻断分裂中期，固定染色后显微镜下分析染色体结构异常。
   • 体内法：给药后采集骨髓细胞，观察中期相染色体畸变率。

3. 微核试验

   • 体外法：药物暴露后，通过细胞松弛素B阻断胞质分裂，吉姆萨染色计数微核形成的双核细胞比例。
   • 体内法：给药72小时后采集骨髓或外周血细胞，染色分析微核率。

4. 彗星试验

   • 单细胞悬液与低熔点琼脂糖混合，裂解细胞后碱性电泳（pH>13），银染或荧光染色评估DNA迁移形成的“彗星尾”。

5. 体外代谢模拟

   • 肝微粒体（S9）与药物共孵育，LC-MS/MS分析代谢产物，并行Ames试验或细胞试验验证代谢活化后的遗传毒性。

6. 数据统计与报告

   • 采用OECD或ICH推荐的统计方法（如Fisher精确检验、趋势分析），结合阴性/阳性对照和剂量-反应关系综合判定结果。

注意：因业务调整，暂不接受个人委托测试望见谅。