细菌回复突变试验检测

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检测范围

细菌回复突变试验（Ames试验）主要用于评估化学物质、药物、化妆品、食品添加剂、工业原料及环境污染物等的潜在致突变性。该试验通过检测受试物对组氨酸缺陷型细菌（如鼠伤寒沙门氏菌TA97、TA98、TA100、TA102、TA1535等菌株，以及大肠杆菌WP2系列菌株）的回复突变能力，间接反映其诱导DNA损伤或基因突变的可能性。检测范围涵盖单一化合物、混合物及复杂环境样本的体外遗传毒性筛选，符合国际标准（如OECD 471、ICH S2R1等）。

检测项目

1. 组氨酸需求型回复突变检测：通过受试物处理组氨酸缺陷型菌株，观察其是否恢复合成组氨酸的能力，形成可见菌落。
2. 阳性/阴性对照测试：阳性对照使用已知致突变物（如2-硝基芴、叠氮钠），阴性对照采用溶剂或空白处理，验证试验系统有效性。
3. 剂量效应分析：设置多个浓度梯度，评估受试物致突变作用的剂量依赖性。
4. 代谢活化系统测试：添加哺乳动物肝微粒体酶（S9混合液），模拟体内代谢环境，检测代谢产物对突变率的影响。

检测仪器

1. 微生物培养箱：用于细菌的恒温（37℃）培养，控制湿度与CO₂浓度。
2. 自动菌落计数器：精确量化琼脂平板上回复突变菌落数量。
3. 酶标仪/分光光度计：测定细菌悬液浓度（OD600值）及代谢活性。
4. PCR仪及电泳设备：验证菌株基因型（如uvrB缺失、R因子携带状态）。
5. 离心机与生物安全柜：用于细菌离心富集及无菌操作。
6. 恒温摇床：提供液体培养条件下的均质振荡环境。

检测方法

1. 菌株选择与准备：

   • 选用标准菌株（如TA98、TA100），经基因型鉴定（组氨酸缺陷、脂多糖屏障缺失等）及自发突变率验证。
   • 菌液制备：将冻存菌株接种于营养肉汤，37℃振荡培养至对数生长期（OD600≈0.8）。

2. 样品处理与分组：

   • 受试物溶解于适当溶剂（如DMSO、无菌水），设置多个浓度组（通常覆盖0.1–5000 μg/皿），同时设计阴性（溶剂）、阳性对照组。

3. 代谢活化系统应用：

   • 添加含S9肝微粒体的混合液（比例通常为10% v/v），模拟哺乳动物体内代谢条件。

4. 平板掺入法或预培养法：

   • 平板掺入法：将顶层琼脂（45℃）、菌液、受试物及S9混合液（如适用）依次混合，倾注于最低葡萄糖琼脂平板，凝固后倒置培养48小时。
   • 预培养法：菌液与受试物预孵育20–30分钟后再混合顶层琼脂，提升代谢敏感度。

5. 培养与结果判读：

   • 平板于37℃避光培养48–72小时，统计回复突变菌落数。
   • 判定标准：受试物组菌落数≥2倍阴性对照组，且呈剂量依赖性增长，视为致突变阳性。

注意：因业务调整，暂不接受个人委托测试望见谅。