细胞吞噬检测

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细胞吞噬检测技术规范

一、检测范围 细胞吞噬检测适用于以下研究领域：

1. 免疫学研究：评估巨噬细胞、中性粒细胞等免疫细胞对病原体、凋亡细胞或微粒的吞噬能力；
2. 肿瘤研究：分析肿瘤相关巨噬细胞（TAM）对肿瘤细胞或纳米颗粒的吞噬作用；
3. 药物筛选：检测药物对吞噬功能的影响（如免疫增强剂或抑制剂）；
4. 病原体感染研究：量化宿主细胞对细菌、真菌或病毒颗粒的吞噬效率。

二、检测项目

1. 吞噬率：统计特定时间内发生吞噬作用的细胞比例；
2. 吞噬指数：单个细胞吞噬颗粒的平均数量；
3. 荧光标记颗粒的吞噬效率：如荧光微球、FITC标记的细菌或pHrodo标记的凋亡细胞；
4. 吞噬动力学：时间梯度下的吞噬速率和最大吞噬能力；
5. 吞噬相关信号通路：检测吞噬后溶酶体融合、活性氧（ROS）生成或炎症因子释放。

三、检测仪器

1. 流式细胞仪：用于快速定量分析荧光标记颗粒的吞噬效率；
2. 荧光显微镜/共聚焦显微镜：观察吞噬过程的形态学变化及颗粒定位；
3. 酶标仪：检测化学发光或荧光强度变化（如ROS检测试剂盒）；
4. 高内涵成像系统：自动化分析多孔板中细胞的吞噬表型；
5. 离心机与细胞培养箱：用于样本制备及实验条件维持。

四、检测方法

1. 样本准备：

   • 分离目标细胞（如外周血单核细胞或永生化巨噬细胞系）；
   • 调整细胞密度至1×10⁶/mL，接种于培养板或共聚焦专用皿。

2. 颗粒标记与孵育：

   • 使用荧光染料（如FITC、pHrodo Red）标记吞噬颗粒（直径1-5μm）；
   • 按比例（通常1:10-1:100）将颗粒与细胞共孵育（37℃、5% CO₂，30-60分钟）；
   • 终止反应：加入预冷PBS洗涤3次，去除未吞噬颗粒。

3. 检测流程：

   • 流式细胞术：收集细胞，分析荧光阳性细胞比例及平均荧光强度（MFI）；
   • 荧光显微镜法：固定细胞后，通过荧光通道计数含颗粒的细胞；
   • 溶酶体共定位：使用LysoTracker标记溶酶体，共聚焦成像验证吞噬体-溶酶体融合。

4. 数据处理：

   • 吞噬率（%）=（吞噬颗粒的细胞数/总细胞数）×100；
   • 吞噬指数=∑（每个细胞的吞噬颗粒数）/总吞噬细胞数；
   • 采用GraphPad Prism或ImageJ进行统计学分析与图像处理。

（注：实验需设置阴性对照（未加颗粒组）与阳性对照（已知吞噬能力细胞），并重复3次以上。）

注意：因业务调整，暂不接受个人委托测试望见谅。