细胞样本流式检测

(CMA)     (ISO) (高新技术企业)

1. 检测范围

• 样本类型
• 疾病类型
• 细胞状态

2. 检测项目

• 表面/胞内标志物
• 功能分析
• 细胞分选

3. 检测仪器

• 流式细胞仪型号
• 辅助设备

4. 检测方法

• 样本制备
• 抗体标记
• 固定破膜
• 上机检测
• 数据分析
• 质量控制
  确保每个子项有具体例子，比如检测项目中的CD3、CD19等，仪器中的具体型号，方法中的具体步骤和试剂。这样用户能得到一个结构清晰、内容详实的文章。

细胞样本流式检测技术报告

检测范围

1. 样本类型：外周血、骨髓穿刺液、组织分离细胞（如肿瘤组织、淋巴结）、培养细胞系、体液（如胸腹水、脑脊液）。
2. 适用疾病：血液系统疾病（白血病、淋巴瘤）、免疫相关疾病（自身免疫病、免疫缺陷病）、实体瘤微环境分析、感染性疾病（如HIV免疫分型）。
3. 细胞状态：活细胞比例、细胞周期（G0/G1、S、G2/M期）、凋亡/坏死状态、活性氧（ROS）水平、钙离子浓度等动态指标。

检测项目

1. 表面标志物检测：
   • 免疫表型分析：如淋巴细胞亚群（CD3/CD4/CD8/CD19/CD56）、白血病免疫分型（CD34/CD117/CD33）。
   • 功能受体检测：如PD-1/PD-L1、趋化因子受体（CXCR4/CCR5）。
2. 胞内因子检测：
   • 细胞因子（IFN-γ、IL-2、TNF-α）、磷酸化蛋白（p-AKT、p-STAT）、转录因子（FoxP3、T-bet）。
3. 功能分析：
   • 增殖能力（CFSE或EdU标记）、凋亡（Annexin V/PI双染）、线粒体膜电位（JC-1染色）、吞噬功能（pHrodo标记）。
4. 细胞分选：基于特定标志物（如CD34+造血干细胞）分选高纯度细胞亚群。

检测仪器

1. 流式细胞仪：
   • 分析型：BD FACSCanto™ II（3激光8色）、Beckman CytoFLEX SRT（4激光13色）。
   • 分选型：BD FACSAria™ III（高速分选，纯度>99%）、Sony SH800S（芯片分选技术）。
2. 辅助设备：
   • 离心机（低速/高速）、生物安全柜（样本预处理）、恒温培养箱（细胞激活）、倒置荧光显微镜（预检细胞状态）。
   • 数据分析软件：FlowJo v10、BD FACSDiva™、Kaluza Analysis。

检测方法

1. 样本制备：
   • 外周血/骨髓：EDTA或肝素抗凝，密度梯度离心（Ficoll-Paque™）分离单个核细胞。
   • 组织样本：机械破碎联合胶原酶IV消化（37℃, 30分钟），70μm滤网过滤去除碎片。
   • 培养细胞：胰酶消化后PBS洗涤，调整浓度至1×10^6 cells/mL。
2. 抗体标记：
   • 直接染色：荧光偶联单抗（如FITC-CD3、APC-Cy7-CD45）避光孵育（4℃, 30分钟）。
   • 胞内染色：先固定（4%多聚甲醛）、破膜（0.1% Triton X-100或商品化破膜剂），再标记胞内靶标。
3. 上机检测：
   • 校准：使用标准微球（CST beads）调整光路与荧光补偿。
   • 参数设置：FSC/SSC设门排除碎片，检测通道选择（如FITC-530/30、PE-585/42）。
   • 数据采集：每样本获取≥10,000个细胞事件，分选模式流速设为“Low”（确保精度）。
4. 数据分析：
   • 设门策略：依次圈选活细胞（PI-/Annexin V-）、单细胞（FSC-A/FSC-H）、目标亚群（如CD3+CD4+）。
   • 统计学处理：FlowJo导出MFI（平均荧光强度）或细胞比例，GraphPad Prism进行差异分析（t检验/ANOVA）。
5. 质量控制：
   • 对照设置：空白对照（未染色细胞）、同型对照（非特异性抗体）、FMO（荧光减一对照）。
   • 仪器维护：每日执行CS&T（ cytometry setup and tracking）校准，每月清洗液路系统。

注意：因业务调整，暂不接受个人委托测试望见谅。