流式免疫功能检测

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检测范围

流式免疫功能检测主要用于评估机体免疫系统的组成、功能状态及相关疾病标志物。其检测范围涵盖：

1. 免疫细胞亚群分析：包括淋巴细胞（T细胞、B细胞、NK细胞）、单核细胞、树突状细胞等；
2. 免疫细胞功能检测：如细胞活化、增殖、凋亡、细胞因子分泌及细胞毒性功能；
3. 免疫相关疾病标志物：如免疫缺陷病、自身免疫性疾病、血液系统肿瘤及移植免疫监测等；
4. 细胞表面及胞内分子表达：如CD分子、信号通路蛋白、细胞因子受体等。

检测项目

流式免疫功能检测包含以下核心项目：

1. 淋巴细胞亚群分析
   • T细胞：CD3+、CD4+（辅助性T细胞）、CD8+（细胞毒性T细胞）、调节性T细胞（CD4+CD25+FoxP3+）；
   • B细胞：CD19+、CD20+、CD27+（记忆B细胞）；
   • NK细胞：CD56+、CD16+。
2. 免疫细胞功能分析
   • 细胞内细胞因子检测（如IFN-γ、IL-2、TNF-α）；
   • 细胞增殖（CFSE或EdU标记）；
   • 细胞毒性（穿孔素、颗粒酶B表达）；
   • 活化标志物（CD69、CD25、HLA-DR）。
3. 疾病特异性检测
   • 白血病/淋巴瘤免疫分型（如CD5、CD10、CD34）；
   • 自身抗体相关B细胞（如CD19+CD27+CD38+浆细胞）；
   • 移植后免疫监测（供体特异性抗体、Treg细胞比例）。

检测仪器

流式免疫功能检测依赖以下仪器设备：

1. 流式细胞仪：
   • 多色配置（如BD FACSCanto II、Beckman Coulter CytoFLEX），支持8-20色荧光检测；
   • 高灵敏度光电倍增管（PMT）及激光器（488nm蓝光、640nm红光等）。
2. 配套设备：
   • 高速离心机（用于细胞分离）；
   • 恒温孵育箱（37℃细胞培养条件）；
   • 生物安全柜（样本预处理）；
   • 数据分析软件（FlowJo、Kaluza、BD FACSDiva）。

检测方法

流式免疫功能检测遵循标准化实验流程：

1. 样本处理：
   • 外周血/骨髓/组织样本经密度梯度离心分离单个核细胞（PBMC）；
   • 细胞悬液调整至1×10^6/mL浓度。
2. 抗体标记：
   • 直接免疫荧光法：加入荧光标记单克隆抗体（如FITC-CD3、APC-CD4），避光孵育20分钟；
   • 胞内染色：固定破膜后检测胞内分子（如FoxP3、细胞因子）。
3. 细胞刺激与固定：
   • 功能检测需预刺激（如PMA/离子霉素刺激4小时，加入Brefeldin A阻断分泌）；
   • 4%多聚甲醛固定细胞，PBS洗涤后保存于4℃。
4. 上机检测：
   • 流式细胞仪校准（微球调整PMT电压、补偿矩阵）；
   • 获取至少10,000个目标细胞事件，排除碎片及死细胞（7-AAD/DAPI染色）。
5. 数据分析：
   • 通过设门策略（Gating）圈定目标细胞群；
   • 计算阳性细胞百分比、平均荧光强度（MFI）及细胞绝对计数。

注意：因业务调整，暂不接受个人委托测试望见谅。