弹性蛋白酶检测

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检测范围

弹性蛋白酶的检测主要应用于生物医学研究、临床诊断及药物开发领域。检测样本类型包括人体或动物的血清、血浆、组织匀浆、细胞培养上清液以及肺泡灌洗液等。在临床场景中，检测范围涵盖胰腺疾病（如胰腺炎）、肺部疾病（如慢性阻塞性肺病、肺气肿）、炎症反应评估及肿瘤微环境研究等。此外，检测还可用于评估蛋白酶抑制剂类药物的疗效或毒性。

检测项目

弹性蛋白酶的检测项目主要包括以下内容：

1. 酶活性测定：通过底物降解速率反映弹性蛋白酶的催化活性，常用单位时间内产物生成量表示。
2. 酶浓度检测：定量分析样本中弹性蛋白酶的含量（如μg/mL或nmol/L）。
3. 底物特异性分析：验证酶对特定底物（如弹性蛋白、合成多肽）的降解能力。
4. 抑制剂效应评估：测试抑制剂对酶活性的抑制效率（IC50值）。
5. 酶稳定性研究：分析温度、pH等因素对酶活性的影响。

检测仪器

1. 分光光度计：用于检测底物降解产物的吸光度变化（如对硝基苯胺在410 nm处的吸光值）。
2. 荧光酶标仪：适用于荧光标记底物（如DQF弹性蛋白）的检测，通过荧光强度变化计算酶活性。
3. 高效液相色谱仪（HPLC）：用于分离和定量复杂样本中的弹性蛋白酶及其降解产物。
4. 微孔板振荡器与恒温孵育箱：确保酶反应在恒定温度下进行，提高检测重复性。
5. 电泳系统：通过SDS-PAGE或zymography技术分析弹性蛋白酶的分子量及活性形式。

检测方法

1. 分光光度法

   • 原理：利用合成底物（如N-琥珀酰-丙氨酰-丙氨酰-脯氨酰-缬氨酸对硝基苯胺）被酶解后释放显色物质，通过吸光度变化计算酶活性。
   • 步骤：将样本与底物在37℃孵育，定时测量410 nm处吸光值，通过标准曲线换算酶活性单位。

2. 荧光分析法

   • 原理：使用荧光标记底物（如荧光素标记弹性蛋白），酶解后释放荧光基团，通过荧光强度变化定量活性。
   • 步骤：激发波长485 nm，发射波长535 nm，动态监测荧光信号，数据经软件拟合后获得酶动力学参数。

3. 酶联免疫吸附法（ELISA）

   • 原理：基于抗原-抗体反应，通过双抗体夹心法检测样本中弹性蛋白酶的总浓度。
   • 步骤：包被特异性抗体，加入样本和酶标二抗，显色后测量OD450 nm值，对比标准曲线定量。

4. 明胶酶谱法（Zymography）

   • 原理：通过SDS-PAGE胶中掺入底物（如明胶或弹性蛋白），电泳后酶在复性条件下降解底物，形成透明条带。
   • 步骤：样本经非还原电泳分离，胶体用Triton X-100复性并孵育，考马斯亮蓝染色后观察活性条带位置及强度。

5. 高效液相色谱法（HPLC）

   • 原理：利用色谱柱分离酶解产物，通过紫外或质谱检测器定量分析。
   • 步骤：样本经预处理后进样，采用C18反相色谱柱，流动相为乙腈-水梯度，流速1 mL/min，检测波长280 nm。

注意：因业务调整，暂不接受个人委托测试望见谅。