哺乳动物细胞乏氧模型代谢通量测试

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信息概要

哺乳动物细胞乏氧模型代谢通量测试是一种关键的生物学分析技术，用于模拟细胞在低氧环境下的代谢状态变化。该测试通过量化细胞内的代谢物通量（如葡萄糖、乳酸、ATP等），评估细胞在缺氧条件下的能量代谢途径、氧化还原平衡及生存适应性。检测的重要性在于它不仅有助于揭示肿瘤细胞在乏氧微环境中的耐药机制，还为心血管疾病、神经退行性疾病及组织工程研究提供关键数据，确保实验模型的可靠性和药物筛选的准确性。概括来说，该测试是连接基础研究与临床应用的重要桥梁。

检测项目

葡萄糖摄取率, 乳酸生成率, 氧消耗速率, ATP产生量, NAD+/NADH比率, 线粒体膜电位, 活性氧水平, 谷胱甘肽含量, 丙酮酸激酶活性, 糖酵解通量, 三羧酸循环通量, 脂肪酸氧化率, 氨基酸代谢通量, 细胞增殖率, 凋亡指数, 自噬水平, 缺氧诱导因子表达, 能量电荷, pH值变化, 代谢物同位素标记追踪

检测范围

HeLa细胞, HEK293细胞, MCF-7细胞, HepG2细胞, 小鼠胚胎成纤维细胞, 人脐静脉内皮细胞, 神经干细胞, 心肌细胞, 肝细胞, 肺癌细胞系, 乳腺癌细胞系, 结肠癌细胞系, 干细胞模型, 原代细胞培养, 3D细胞球体模型, 器官芯片模型, 转基因细胞系, 免疫细胞, 上皮细胞, 间充质干细胞

检测方法

Seahorse细胞能量代谢分析仪法：实时监测细胞耗氧率和产酸率，评估线粒体功能和糖酵解活性。

同位素示踪质谱法：使用稳定同位素标记代谢物，追踪碳或氮流向，量化代谢通量。

荧光探针检测法：应用特异性染料（如JC-1）测量线粒体膜电位和活性氧水平。

酶联免疫吸附测定法：定量分析缺氧诱导因子等蛋白表达，关联代谢调控。

高效液相色谱法：分离和定量细胞内代谢物如ATP、乳酸和谷胱甘肽。

流式细胞术：结合代谢探针，评估细胞群体水平的代谢状态和凋亡。

核磁共振波谱法：无创分析细胞提取物中的代谢物浓度和动力学。

微电极阵列法：直接测量培养环境中的氧分压和pH变化。

基因敲除或过表达模型法：通过遗传修饰验证特定基因对代谢通量的影响。

细胞增殖检测法：使用MTT或CCK-8试剂评估代谢活动与生长的关系。

代谢组学分析：高通量筛选全代谢谱，识别乏氧特异性标志物。

Western blotting法：检测代谢相关蛋白（如PKM2）的表达水平。

实时荧光定量PCR法：量化代谢酶基因的转录变化。

细胞成像技术：结合共聚焦显微镜观察代谢物分布。

生物信息学建模：整合实验数据构建代谢网络模型预测通量。

检测仪器

Seahorse分析仪, 质谱仪, 荧光显微镜, 酶标仪, 高效液相色谱仪, 流式细胞仪, 核磁共振仪, 微电极系统, 实时PCR仪, Western blotting设备, 细胞培养箱, 离心机, 显微镜成像系统, 代谢组学平台, 生物分析仪

问：哺乳动物细胞乏氧模型代谢通量测试在癌症研究中如何应用？答：该测试用于分析肿瘤细胞在缺氧微环境中的代谢重编程，如增强糖酵解，帮助开发靶向代谢的抗癌药物。

问：进行乏氧模型代谢通量测试时需要注意哪些关键因素？答：关键因素包括控制氧浓度稳定性、确保细胞活力、标准化培养条件，以及使用可靠的同位素标记方法以避免偏差。

问：代谢通量测试结果如何验证其准确性？答：可通过多重方法交叉验证，如结合Seahorse分析、质谱数据和生物学功能实验，并与已知代谢数据库对比。

注意：因业务调整，暂不接受个人委托测试望见谅。