Western Blot验证检测

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信息概要

Western Blot验证检测是一种基于免疫印迹技术的蛋白质分析手段，广泛应用于生物医学研究领域，用于特异性检测和定量样品中的目标蛋白质。该项目通过电泳分离、转膜和抗体结合等步骤，实现对蛋白质表达水平、修饰状态（如磷酸化）的高灵敏度验证。检测的重要性在于其能够可靠地确认基因表达结果、评估疾病生物标志物、支持药物靶点验证以及基础研究中的蛋白质功能分析，确保数据的准确性和可重复性。本服务由第三方检测机构提供，涵盖标准化流程和质控措施，为客户提供全面的Western Blot检测解决方案。

检测项目

β-肌动蛋白，GAPDH，p53，EGFR，HER2，AKT，ERK，JNK，p38，STAT3，NF-κB，c-Myc，Cyclin D1，Bcl-2，Bax，Caspase-3，PARP，Tubulin，Vinculin，Laminin，Collagen，Fibronectin，Integrin，Cadherin，E-cadherin，N-cadherin，Vimentin，Snail，Slug，Twist

检测范围

肝组织，肾组织，肺组织，心脏组织，脑组织，脾组织，肌肉组织，脂肪组织，癌细胞系，正常细胞系，干细胞，原代细胞，血清样本，血浆样本，尿液样本，脑脊液样本，组织裂解液，细胞裂解液，重组蛋白，抗体样品，药物处理样本，基因敲除样本，过表达样本，磷酸化样本，糖基化样本，乙酰化样本，泛素化样本，凋亡样本，坏死样本，自噬样本

检测方法

蛋白质提取：使用裂解缓冲液从生物样品中高效提取总蛋白质，确保完整性。

SDS-PAGE电泳：通过聚丙烯酰胺凝胶电泳按分子量分离蛋白质，实现初步分辨。

转膜操作：将凝胶中的蛋白质转移至PVDF或NC膜上，便于后续抗体结合。

封闭处理：用脱脂奶粉或BSA溶液封闭膜上非特异性位点，减少背景噪声。

一抗孵育：与特异性一抗在适宜条件下孵育，靶向识别目标蛋白质。

二抗孵育：使用标记的二抗与一抗结合，放大检测信号。

化学发光检测：应用化学底物产生发光信号，通过成像系统捕获结果。

荧光检测：利用荧光标记抗体进行检测，适用于多重蛋白质分析。

条带定量分析：借助图像分析软件量化条带强度，实现相对表达计算。

内参标准化：以β-肌动蛋白或GAPDH作为内参，校正上样误差。

磷酸化特异性检测：使用磷酸化抗体验证蛋白质修饰状态。

糖基化分析：通过特定抗体检测蛋白质糖基化水平。

免疫共沉淀Western Blot：先进行免疫沉淀富集目标蛋白，再行Western Blot检测。

双向电泳结合：结合2D电泳提高分辨率，用于复杂样品分析。

毛细管Western Blot：采用毛细管电泳技术实现快速、自动化检测。

检测仪器

电泳槽，转印装置，电源供应器，摇床，孵育箱，化学发光成像系统，分光光度计，离心机，微量移液器，水浴锅，磁力搅拌器，pH计，分析天平，超纯水系统，凝胶成像仪

注意：因业务调整，暂不接受个人委托测试望见谅。