细胞沉默靶点验证实验

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信息概要

细胞沉默靶点验证实验是一种通过RNA干扰或基因编辑技术沉默特定基因靶点，并验证其效果的关键实验，广泛应用于药物研发、功能基因组学和疾病机制研究。第三方检测机构提供专业服务，确保实验的准确性、可靠性和重复性，检测的重要性在于避免脱靶效应、评估沉默效率和支持科学决策，从而降低研发风险并提高实验成功率。本服务概括了从细胞培养到分子分析的全面检测流程，涵盖多个参数和方法，以提供详尽的验证报告。

检测项目

沉默效率，细胞存活率，mRNA表达量，蛋白质表达量，脱靶效应，细胞增殖率，细胞凋亡率，细胞周期分布，细胞迁移能力，细胞侵袭能力，基因敲除效率，RNA干扰特异性，细胞形态变化，细胞毒性，IC50值，半数抑制浓度，基因表达 fold change，信号通路活性，磷酸化水平，细胞表面标记物，细胞内钙离子浓度，线粒体膜电位，活性氧水平，DNA损伤，细胞粘附能力，细胞分化状态，肿瘤球形成能力，克隆形成率，细胞衰老指标，自噬水平

检测范围

HeLa细胞系，HEK293细胞系，MCF-7细胞系，A549细胞系，HepG2细胞系，siRNA介导的沉默，shRNA介导的沉默，CRISPR/Cas9介导的基因敲除，慢病毒载体，腺病毒载体，逆转录病毒载体，原代细胞，干细胞，癌细胞系，正常细胞系，小鼠细胞，人细胞，大鼠细胞，昆虫细胞，植物细胞，酵母细胞，细菌细胞，3D细胞培养，2D细胞培养，悬浮细胞，贴壁细胞，高通量筛选，低通量验证，体内模型，体外模型

检测方法

实时荧光定量PCR（qRT-PCR）：用于定量mRNA表达水平，通过荧光信号检测基因沉默效果。

Western blot：用于检测蛋白质表达和修饰，通过抗体结合验证靶点蛋白的变化。

流式细胞术：用于分析细胞表面标记物和细胞内分子，评估细胞群体特征。

MTT assay：用于评估细胞活力和增殖，通过还原MTT染料测量代谢活性。

CCK-8 assay：类似于MTT，用于细胞毒性测试，基于水溶性染料的还原反应。

细胞凋亡检测：通过Annexin V/PI staining等方法，区分凋亡和坏死细胞。

细胞周期分析：使用PI染色和流式细胞仪，确定细胞周期各阶段分布。

细胞迁移 assay：如Transwell assay，评估细胞移动能力。

细胞侵袭 assay：使用Matrigel-coated Transwell，模拟体内侵袭过程。

基因敲除效率验证：通过测序或PCR，确认靶点基因的修饰情况。

脱靶效应分析：通过全基因组测序或微阵列，检测非目标基因的变化。

免疫荧光：用于定位蛋白质表达，通过荧光显微镜观察细胞内分布。

ELISA：用于定量细胞因子或蛋白质，基于抗原-抗体反应。

细胞活力检测：如Trypan blue exclusion，直接计数活细胞比例。

细胞增殖曲线：通过连续计数细胞，绘制生长动力学图表。

检测仪器

实时荧光定量PCR仪，流式细胞仪，显微镜，离心机，酶标仪，细胞培养箱，超净工作台，电泳仪，凝胶成像系统，蛋白印迹系统，细胞计数仪，微孔板阅读器，低温冰箱，水浴锅，振荡器

注意：因业务调整，暂不接受个人委托测试望见谅。