细菌DNA脉冲场凝胶电泳检测

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信息概要

细菌DNA脉冲场凝胶电泳检测是一种先进的分子生物学技术，用于分离和分析大片段DNA，通过交替电场方向实现高分辨率分离。该检测广泛应用于细菌 strain 分型、流行病学调查、感染源追踪和抗生素耐药性监测，对于食品安全控制、临床诊断和公共卫生管理具有重要意义，能有效识别细菌来源、预防疾病传播和优化治疗策略。

检测项目

大肠杆菌PFGE分型,金黄色葡萄球菌PFGE分析,沙门氏菌PFGE检测,李斯特菌PFGE图谱,弯曲杆菌PFGE分析,肺炎克雷伯菌PFGE,铜绿假单胞菌PFGE,肠球菌PFGE,链球菌PFGE,志贺氏菌PFGE,霍乱弧菌PFGE,耶尔森菌PFGE,分枝杆菌PFGE,奈瑟菌PFGE,嗜血杆菌PFGE,军团菌PFGE,布氏杆菌PFGE,炭疽杆菌PFGE,破伤风杆菌PFGE,肉毒杆菌PFGE,淋球菌PFGE,脑膜炎球菌PFGE,百日咳杆菌PFGE,白喉杆菌PFGE,伤寒杆菌PFGE,副伤寒杆菌PFGE,痢疾杆菌PFGE,变形杆菌PFGE,普罗维登斯菌PFGE,摩根菌PFGE

检测范围

大肠杆菌,金黄色葡萄球菌,沙门氏菌,李斯特菌,弯曲杆菌,肺炎克雷伯菌,铜绿假单胞菌,肠球菌,链球菌,志贺氏菌,霍乱弧菌,耶尔森菌,分枝杆菌,奈瑟菌,嗜血杆菌,军团菌,布氏杆菌,炭疽杆菌,破伤风杆菌,肉毒杆菌,淋球菌,脑膜炎球菌,百日咳杆菌,白喉杆菌,伤寒杆菌,副伤寒杆菌,痢疾杆菌,变形杆菌,普罗维登斯菌,摩根菌

检测方法

细菌培养：在适当培养基如LB或选择性培养基上培养细菌，以获得对数生长期细胞用于后续DNA提取。

DNA提取：使用酚氯仿抽提法或商业试剂盒从细菌细胞中纯化基因组DNA，确保高纯度和大片段完整性。

DNA定量：通过紫外分光光度计测量DNA浓度和纯度，调整至合适浓度用于酶切反应。

限制性酶切：应用特定限制性内切酶如XbaI消化DNA，产生大片段用于电泳分离。

酶切条件优化：调整温度、时间和缓冲液条件，以确保DNA完全消化并避免部分酶切。

琼脂糖凝胶制备：配制低熔点琼脂糖凝胶，用于包埋DNA样品并形成栓块。

细胞包埋：将细菌细胞悬浮液与熔融琼脂糖混合，固化后形成栓块以保护DNA结构。

DNA释放：通过酶和去污剂处理栓块，释放DNA并去除蛋白质和细胞碎片。

脉冲场电泳：在脉冲场凝胶电泳仪中运行样品，利用交替电场分离大片段DNA。

电泳条件设置：优化脉冲时间、电压和角度参数，以获得清晰且可重复的电泳图谱。

凝胶染色：使用溴化乙锭或其他荧光染料对凝胶进行染色，可视化DNA条带。

紫外成像：在紫外透射仪下观察染色凝胶，并拍摄图像用于后续分析。

图像分析：借助软件工具分析电泳图谱，比较条带大小和模式进行 strain 分型。

数据分析：基于条带匹配和聚类分析，识别细菌 strain 并评估遗传相关性。

质量控制：包括阳性对照和标准品运行，确保检测过程的准确性和可重复性。

检测仪器

脉冲场凝胶电泳仪,紫外透射仪,凝胶成像系统,高速离心机,水浴锅,摇床,紫外分光光度计,电泳槽,电泳电源,微波炉,分析天平,pH计,微量移液器,冰箱,超净工作台,恒温培养箱,酶标仪,PCR仪,生物安全柜,电泳凝胶铸造系统,核酸定量仪,恒温水浴槽,振荡器,电泳图像分析软件,离心管架,移液器支架,样品存储盒,实验室耗材套装,消毒设备,通风橱

注意：因业务调整，暂不接受个人委托测试望见谅。