游离氨基酸检测

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检测范围

游离氨基酸检测广泛应用于生物医学、食品工业、农业及制药领域。在生物医学中，检测样本包括人体血液、尿液、脑脊液及组织液，用于评估代谢疾病、营养状况或遗传性氨基酸代谢异常。食品工业中，分析乳制品、肉类、谷物及发酵产品中的游离氨基酸含量，以评估营养价值或优化加工工艺。农业领域则涉及植物叶片、种子及土壤样本，用于研究植物生理代谢或肥料效果。制药行业中，检测药物制剂或生产过程中的氨基酸残留，确保产品质量。

检测项目

游离氨基酸检测涵盖20种标准蛋白氨基酸及部分非蛋白氨基酸。具体包括：

• 必需氨基酸：如缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、赖氨酸、苏氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、色氨酸、组氨酸（婴儿必需）。
• 非必需氨基酸：如谷氨酸、天冬氨酸、丙氨酸、甘氨酸、丝氨酸等。
• 特殊类型：如γ-氨基丁酸（GABA）、牛磺酸、瓜氨酸等代谢相关氨基酸。 部分检测还可区分D-型和L-型异构体（如D-丝氨酸），或在特定样本中检测稀有氨基酸（如羟脯氨酸）。

检测仪器

1. 高效液相色谱仪（HPLC）：配备紫外（UV）或荧光检测器（FLD），常用于分离衍生化后的氨基酸，具有高分辨率和重复性。
2. 液相色谱-串联质谱联用仪（LC-MS/MS）：适用于痕量分析，可同时定量多种氨基酸，无需衍生化步骤，灵敏度达pmol级别。
3. 氨基酸分析仪：专用离子交换色谱系统，集成柱后茚三酮衍生化模块，自动化程度高，符合国际标准（如AOAC）。
4. 辅助设备：冷冻离心机（用于样本去蛋白）、氮吹仪（浓缩样本）、0.22 μm滤膜（过滤净化）及衍生化试剂（如邻苯二甲醛、丹磺酰氯）。

检测方法

1. 样品前处理：

   • 生物体液：取血清/血浆，加入磺基水杨酸或乙腈沉淀蛋白，离心（12,000 rpm，10 min）后取上清液，经0.22 μm滤膜过滤。
   • 食品/植物组织：研磨后以80%乙醇提取，超声辅助萃取，离心后取上清液浓缩。
   • 衍生化：采用邻苯二甲醛（OPA）/巯基乙醇（适用于伯胺）或丹磺酰氯（DNS-Cl，伯仲胺通用）进行柱前衍生，增强检测信号。

2. 色谱条件：

   • HPLC法：C18反相色谱柱（4.6×150 mm，3 μm），流动相A（50 mM醋酸钠，pH 6.5）与B（乙腈-甲醇，1:1），梯度洗脱（0-30 min，B相5%→95%），流速1.0 mL/min，柱温35℃，荧光检测（Ex 340 nm，Em 455 nm）。
   • LC-MS/MS法：HILIC色谱柱，流动相为0.1%甲酸水溶液和乙腈，电喷雾离子源（ESI+），多反应监测（MRM）模式定量。

3. 定量分析： 采用外标法或内标法（如正缬氨酸作内标），通过标准曲线计算样本中氨基酸浓度，数据由仪器软件（如LabSolutions、Chromeleon）自动处理，结果以μmol/L或mg/100g为单位报告。

注意：因业务调整，暂不接受个人委托测试望见谅。