细胞活力检测

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检测范围

细胞活力检测广泛应用于生物医学研究、药物开发、毒性测试、环境监测以及工业产品（如化妆品、食品添加剂）的安全性评估等领域。具体场景包括：

1. 肿瘤研究：评估化疗药物或放疗对癌细胞的杀伤效果。
2. 干细胞与再生医学：监测干细胞增殖与分化过程中的活性变化。
3. 药物筛选：高通量检测候选化合物对细胞存活率的影响。
4. 环境毒理学：分析污染物（如重金属、微塑料）对水生或哺乳动物细胞的毒性。
5. 疫苗生产：优化细胞培养条件以提升疫苗产量。

检测项目

1. 台盼蓝染色法：通过区分死细胞（蓝色）与活细胞（无色）的比例，计算细胞存活率。
2. MTT法：基于线粒体酶活性，将MTT还原为紫色甲瓒，通过吸光度定量细胞代谢活性。
3. CCK-8检测：利用水溶性四唑盐（WST-8）在脱氢酶作用下生成橙色甲瓒，灵敏度高于MTT法。
4. ATP检测：通过荧光素酶反应测定细胞内ATP含量，直接反映活细胞能量状态。
5. 荧光染料法：如Calcein-AM（标记活细胞绿色）与碘化丙啶（PI，标记死细胞红色）联用。
6. 乳酸脱氢酶（LDH）释放试验：检测细胞膜完整性，破裂细胞释放LDH，与培养基中底物反应生成红色产物。

检测仪器

1. 酶标仪：用于读取MTT、CCK-8、LDH等比色或荧光试剂的吸光度（OD值），波长范围覆盖450–600 nm。
2. 流式细胞仪：配合荧光染料（如Calcein-AM/PI）实现活/死细胞的快速定量与分选。
3. 荧光显微镜：可视化观察活细胞（绿色荧光）与死细胞（红色荧光）的空间分布。
4. 细胞计数器：结合台盼蓝染色，自动统计活细胞与死细胞数量。
5. 微孔板离心机：用于悬浮细胞检测前的沉淀步骤，避免细胞损失。
6. 生物发光检测仪：高灵敏度检测ATP含量，适用于低细胞密度样本。

检测方法

1. 台盼蓝染色法

   • 步骤：将细胞悬液与0.4%台盼蓝溶液按1:1混合，静置3分钟；
   • 计数：血球计数板或自动细胞分析仪统计活细胞率（未染色细胞占比）。

2. MTT法

   • 孵育：向细胞中加入MTT溶液（终浓度0.5 mg/mL），37℃孵育4小时；
   • 溶解：吸弃培养基，加入DMSO溶解甲瓒结晶；
   • 检测：酶标仪在570 nm波长下读取OD值，计算相对细胞活力。

3. CCK-8法

   • 加样：每孔加入10%体积的CCK-8试剂，避光孵育1–4小时；
   • 读数：450 nm波长下测定OD值，活细胞比例与OD值正相关。

4. ATP检测

   • 裂解：加入裂解液释放细胞内ATP，离心去除碎片；
   • 反应：混合荧光素酶试剂，检测发光值（RLU），通过标准曲线换算ATP浓度。

5. Calcein-AM/PI双染法

   • 染色：Calcein-AM（2 μM）与PI（4 μg/mL）共孵育15分钟；
   • 分析：流式细胞仪或荧光显微镜下统计活细胞（绿色）与死细胞（红色）比例。

6. LDH释放试验

   • 样本处理：离心收集细胞培养上清；
   • 反应：加入LDH底物（含INT盐），避光孵育30分钟；
   • 终止：加入终止液，490 nm波长测定OD值，计算细胞毒性百分比。

注意：因业务调整，暂不接受个人委托测试望见谅。