褐藻寡糖的聚合度检测

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检测范围

褐藻寡糖的聚合度检测主要针对由褐藻多糖（如褐藻胶、岩藻聚糖等）经物理、化学或酶解方法制备的低聚糖片段。检测范围通常覆盖聚合度（DP）为2~10的寡糖单体及其混合物，包括不同来源（如海带、马尾藻等）或不同降解工艺（酸解、氧化降解、酶解等）获得的褐藻寡糖样品。此外，检测对象还可能涉及寡糖的分子量分布、结构异构体及杂质含量分析。

检测项目

1. 聚合度分布：测定样品中不同聚合度寡糖的组成比例（如DP2、DP3、DP4等）。
2. 分子量测定：通过标准曲线或质谱法确定寡糖的分子量范围。
3. 单糖组成分析：验证寡糖中甘露糖醛酸（M）、古洛糖醛酸（G）或其他特征单糖的比例。
4. 结构确认：解析寡糖的糖苷键类型（如β-1,4或α-1,3连接）及还原端结构。
5. 杂质检测：评估样品中未降解多糖、无机盐或有机溶剂的残留量。

检测仪器

1. 高效液相色谱（HPLC）：配备示差折光检测器（RID）或蒸发光散射检测器（ELSD），用于寡糖的分离与定量。
2. 基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）：精确测定寡糖的分子量及聚合度。
3. 凝胶渗透色谱（GPC）：结合多角度激光光散射（MALLS）检测器，分析寡糖的分子量分布。
4. 离子色谱（IC）：用于单糖组成及硫酸基含量的测定。
5. 核磁共振波谱（NMR）：通过¹H-NMR或¹³C-NMR解析寡糖的精细结构。

检测方法

1. 样品预处理

   • 溶解：将褐藻寡糖溶于超纯水或特定缓冲液（如磷酸盐缓冲液），超声辅助分散。
   • 脱盐：采用透析法或凝胶柱脱除样品中的无机盐及小分子杂质。

2. HPLC分析

   • 色谱柱：选用氨基柱（如TSKgel Amide-80）或亲水相互作用色谱柱（HILIC）。
   • 流动相：乙腈-水梯度洗脱（如乙腈比例从75%降至50%，流速1.0 mL/min）。
   • 检测：通过RID或ELSD采集信号，以标准品（如DP2-DP6褐藻寡糖）为参照定量。

3. MALDI-TOF-MS测定

   • 基质制备：将2,5-二羟基苯甲酸（DHB）溶于乙腈-水（1:1）溶液。
   • 点样：混合样品与基质溶液（1:10），干燥后上机分析。
   • 参数：反射正离子模式，质量范围500~3000 Da，激光强度调节至信号稳定。

4. GPC-MALLS联用

   • 色谱条件：Shodex OHpak SB-804 HQ色谱柱，流动相为0.1 M NaNO₃溶液（含0.02% NaN₃）。
   • 数据处理：通过ASTRA软件计算数均分子量（Mn）和分散度（Đ）。

5. 单糖组成分析（IC法）

   • 水解：将寡糖样品在2 M三氟乙酸（TFA）中110℃水解4小时。
   • 分离：CarboPac PA20色谱柱，氢氧化钠梯度洗脱，脉冲安培检测器（PAD）定量甘露糖醛酸、古洛糖醛酸等单糖。

6. NMR结构解析

   • 样品制备：将寡糖溶解于D₂O，冻干3次以去除水分。
   • 测试条件：¹H-NMR（600 MHz，25℃），通过化学位移（δ 4.5~5.5 ppm）及偶合常数判断糖苷键构型。

注意：因业务调整，暂不接受个人委托测试望见谅。