体外成瘤性检测

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检测范围

体外成瘤性检测主要用于评估化合物、药物、生物材料或环境污染物等是否具有诱导正常细胞恶性转化的潜力。该检测广泛应用于药物研发（如抗癌药物筛选）、化妆品安全性评价、医疗器械生物相容性测试以及致癌物毒理学研究等领域。此外，检测对象还包括基因编辑细胞、干细胞疗法产品等生物技术衍生物，以确保其临床应用的安全性。

检测项目

1. 细胞增殖分析：通过检测细胞生长曲线、群体倍增时间等，评估受试物对细胞增殖能力的影响。
2. 克隆形成实验：分析单细胞在低密度条件下的集落形成效率，反映细胞自主增殖潜力。
3. 软琼脂集落形成试验：模拟三维环境中细胞的锚定非依赖性生长能力，用于判断细胞恶性转化特征。
4. 侵袭与迁移能力检测：通过Transwell或划痕实验，评估细胞的转移和侵袭潜能。
5. 基因表达分析：检测致癌相关基因（如c-Myc、Ras）或抑癌基因（如p53）的表达变化。
6. 端粒酶活性检测：端粒酶异常激活与细胞永生化及癌变密切相关。

检测仪器

1. 细胞培养箱：提供恒定的温度（37℃）、湿度及CO₂浓度（5%），用于细胞培养。
2. 倒置显微镜：观察细胞形态变化及集落形成情况。
3. 流式细胞仪：分析细胞周期分布、凋亡率及表面标志物表达。
4. 实时定量PCR仪（qPCR）：定量检测致癌相关基因的mRNA表达水平。
5. 酶标仪：用于CCK-8、MTT等细胞增殖/毒性检测试剂的吸光度测定。
6. 荧光显微镜：观察荧光标记的侵袭/迁移细胞或特定蛋白定位。
7. 超净工作台：保障无菌操作环境，避免细胞污染。

检测方法

1. 软琼脂集落形成试验

   • 制备含0.5%琼脂的底层培养基，凝固后覆盖含0.3%琼脂的细胞悬液（密度1×10⁴/mL）。
   • 培养2-3周后，显微镜下计数直径>50 μm的集落，计算形成率。

2. Transwell侵袭实验

   • 在Transwell小室上室铺Matrigel基质胶，接种细胞（1×10⁵/室），下室添加趋化因子（如FBS）。
   • 24-48小时后，甲醇固定穿过膜的细胞，结晶紫染色并计数。

3. 基因表达分析

   • 提取细胞总RNA，逆转录为cDNA，采用SYBR Green法进行qPCR扩增。
   • 以GAPDH为内参基因，通过2^(-ΔΔCt)法计算目标基因相对表达量。

4. 端粒酶活性检测（TRAP法）

   • 裂解细胞提取端粒酶，加入端粒延伸引物和扩增引物进行PCR反应。
   • 电泳分析扩增产物条带，或采用荧光探针定量活性强度。

5. 数据分析

   • 使用GraphPad Prism或SPSS进行统计学分析（t检验或ANOVA），结果以均值±标准差表示，p<0.05视为显著差异。
   • 图像处理软件（如ImageJ）用于集落计数及荧光信号定量。

注意：因业务调整，暂不接受个人委托测试望见谅。