细胞凋亡检测

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检测范围

细胞凋亡检测适用于多种研究场景，包括但不限于：

1. 基础医学研究：探究疾病发生机制（如肿瘤、神经退行性疾病）、药物作用靶点及基因功能验证。
2. 药物开发：评估化疗药物、靶向治疗药物或新型化合物的促凋亡或抗凋亡活性。
3. 临床诊断：辅助癌症、免疫性疾病及感染性疾病的病理分析。
4. 细胞生物学研究：分析细胞应激（如辐射、氧化损伤）、发育生物学中的程序性死亡过程。

检测项目

1. 膜联蛋白V（Annexin V）/碘化丙啶（PI）双染色：区分早期凋亡（Annexin V+，PI-）与晚期凋亡或坏死（Annexin V+，PI+）。
2. TUNEL（末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记）法：检测DNA断裂，特异性标记凋亡细胞核。
3. Caspase活性检测：通过荧光底物或比色法测定Caspase-3/7、Caspase-8/9等关键酶活性。
4. 线粒体膜电位检测（JC-1或TMRE染色）：评估线粒体膜完整性变化，反映凋亡早期事件。
5. 凋亡相关蛋白表达分析：Western Blot或流式细胞术检测Bcl-2、Bax、p53等蛋白表达水平。

检测仪器

1. 流式细胞仪：用于Annexin V/PI双染色、Caspase活性及线粒体膜电位的高通量定量分析。
2. 荧光显微镜/共聚焦显微镜：观察TUNEL染色或JC-1标记的凋亡细胞形态及亚细胞结构变化。
3. 酶标仪：通过比色法或荧光法检测Caspase活性或细胞色素C释放。
4. Western Blot系统：分析凋亡相关蛋白的表达及剪切产物（如cleaved PARP）。
5. 高内涵筛选系统：整合多参数成像与数据分析，适用于药物筛选中的凋亡表型分析。

检测方法

1. Annexin V/PI双染色法：

   • 步骤：收集细胞后，用Annexin V-FITC与PI避光孵育，流式细胞术分析。
   • 关键点：需新鲜样本，避免固定导致的假阳性。

2. TUNEL法：

   • 步骤：固定细胞后，用末端标记试剂（如Br-dUTP）标记断裂DNA，荧光显微镜下观察。
   • 关键点：需设立阴性对照（如DNase I处理组）以提高特异性。

3. Caspase活性检测（以Caspase-3为例）：

   • 步骤：裂解细胞后，加入荧光底物Ac-DEVD-AMC，酶标仪检测释放的荧光信号。
   • 关键点：需同步检测阳性对照（凋亡诱导剂处理组）。

4. 线粒体膜电位检测（JC-1染色）：

   • 步骤：JC-1染色后，流式细胞术分析红/绿荧光比值变化。
   • 关键点：避免长时间孵育导致染料毒性。

5. 凋亡蛋白表达分析：

   • 步骤：提取细胞总蛋白，Western Blot检测Bcl-2家族蛋白或Caspase剪切产物。
   • 关键点：需优化抗体浓度及曝光时间以减少背景信号。

注意：因业务调整，暂不接受个人委托测试望见谅。