体外哺乳类细胞染色体畸变试验检测

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检测范围 体外哺乳类细胞染色体畸变试验的检测范围主要覆盖以下领域：

1. 受试物类型：包括化学物质（如工业化学品、农药）、药物（如候选新药）、环境污染物（如重金属、有机污染物）及生物制品等。
2. 适用细胞系：常用中国仓鼠卵巢细胞（CHO）、中国仓鼠肺细胞（CHL）、人外周血淋巴细胞及V79细胞系等。
3. 应用场景：适用于遗传毒性评价、药物非临床安全性研究、化学品注册（如REACH法规）及职业暴露风险评估等。

检测项目 试验核心检测项目包括：

1. 染色体结构畸变：
   • 断裂（染色体单断裂、双断裂、粉碎化）。
   • 缺失（无着丝粒断片、微小体）。
   • 交换（双着丝粒体、环状染色体）。
   • 裂隙（非稳定性染色单体损伤）。
2. 染色体数目异常（可选分析）：多倍体、内复制等。
3. 细胞毒性评估：通过相对细胞增殖率（RPD）或相对悬浮生长（RSG）量化受试物对细胞存活的影响。
4. 代谢活化系统验证：采用大鼠肝S9混合物模拟体内代谢环境，检测前体物质遗传毒性。

检测仪器 试验涉及的关键仪器及设备：

1. 倒置相差显微镜：用于细胞形态观察及培养状态监控。
2. CO₂细胞培养箱：维持细胞生长环境（37℃、5% CO₂、95%湿度）。
3. 低速离心机：用于细胞收集及制片前处理。
4. 流式细胞仪（可选）：分析细胞周期分布及凋亡率。
5. 全自动染色机：完成吉姆萨（Giemsa）或荧光染色（如Hoechst 33258）。
6. 显微图像分析系统：配备Metafer或同类软件，半自动化统计畸变率。

检测方法 试验流程依据OECD 473指南及ICH S2(R1)标准，具体步骤如下：

1. 细胞培养与处理：
   • 指数生长期细胞暴露于受试物（含/不含S9混合物），设5个剂量组（最高剂量为50%细胞抑制浓度），阴性对照（溶剂）及阳性对照（如丝裂霉素C）。
2. 细胞收获与制片：
   • 处理后24h（直接作用）或48h（代谢活化）收集细胞，经0.075M KCl低渗处理，甲醇-冰醋酸（3:1）固定，滴片法制备染色体标本。
3. 染色与观察：
   • 吉姆萨染色（4%，pH 6.8）10分钟，油镜下分析至少200个分散良好的中期分裂相（每剂量组双盲读片）。
4. 畸变判定标准：
   • 根据《ICH遗传毒性试验数据评价标准》，裂隙不计入阳性结果，需记录结构畸变细胞率及畸变总数。
5. 数据分析：
   • 采用卡方检验或Fisher精确检验比较剂量组与对照组畸变率差异，畸变率呈剂量依赖性增加且具统计学意义（p<0.05）判定为阳性。

注意：因业务调整，暂不接受个人委托测试望见谅。