木头线虫检测

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木材线虫检测技术规范

一、检测范围

1. 检测对象包括原木、锯材、木质包装材料（如托盘、垫木）、木制品（家具、工艺品）等所有可能携带线虫的木质材料。
2. 适用场景涵盖进出口检疫、国内流通监管、林区病虫害监测及仓储物流环节的抽检。
3. 重点针对松科植物（如松树、云杉）及其制品，因松材线虫（Bursaphelenchus xylophilus）为主要检疫对象。

二、检测项目

1. 目标线虫种类
   • 松材线虫（Bursaphelenchus xylophilus）
   • 拟松材线虫（Bursaphelenchus mucronatus）
   • 其他潜在致病线虫（如伞滑刃线虫属Rhadinaphelenchus）
2. 辅助检测内容
   • 线虫携带的真菌或细菌共生体分析
   • 木材含水率及虫道痕迹初筛

三、检测仪器

1. 核心设备
   • 生物显微镜（配备相差或微分干涉对比功能，放大倍数400-1000×）
   • 恒温培养箱（25-30℃可控，用于线虫分离培养）
   • 离心机（转速3000-5000 rpm，用于样本浓缩）
2. 辅助工具
   • 贝尔曼漏斗装置（线虫分离专用）
   • 超低温冰箱（-80℃，保存分子检测样本）
   • PCR仪（用于DNA扩增鉴定）
   • 体视显微镜（10-40×，观察虫道及样本预处理）

四、检测方法

1. 样本采集与处理
   • 按GB/T 27634-2011标准，从木材病变部位（蓝变、蛀孔）钻取木屑样本（3-5 g），粉碎后过20目筛。
2. 线虫分离
   • 贝尔曼漏斗法：样本置于双层纱布，加水浸没，25℃静置24小时，收集底部悬液。
   • 离心法：悬液以3000 rpm离心5分钟，取沉淀制片。
3. 形态学鉴定
   • 显微镜下观察线虫形态特征：测量体长、口针长度、尾部形态（松材线虫尾部钝圆，拟松材线虫具尾尖突）。
   • 依据《植物检疫线虫鉴定标准》比对数据库图像。
4. 分子检测
   • DNA提取：采用CTAB法提取线虫基因组。
   • PCR扩增：使用特异性引物（如Bx-F/R靶向松材线虫rDNA-ITS区），扩增后通过电泳或荧光定量判断结果。
   • 实时荧光PCR：参照SN/T 4356-2015标准，检测灵敏度达单条线虫级别。

检测依据标准

• ISPM 15（国际贸易中木质包装材料管理准则）
• GB/T 35342-2017《松材线虫病检疫技术规程》
• SN/T 1143-2019《出口木制品检疫规程》

注意：因业务调整，暂不接受个人委托测试望见谅。