细胞抗氧化检测

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检测范围

细胞抗氧化检测主要针对生物体内外源性或内源性物质对细胞氧化应激水平的调控作用，涵盖动植物细胞、微生物细胞以及特定细胞系（如HEK293、HepG2等）。检测范围包括但不限于：天然产物提取物（如多酚、黄酮类化合物）、合成药物、食品添加剂、环境污染物等对细胞抗氧化能力的影响。此外，该检测还可用于评估氧化损伤相关疾病（如神经退行性疾病、心血管疾病）的细胞模型中的抗氧化干预效果。

检测项目

1. 活性氧（ROS）水平检测：定量分析细胞内过氧化氢（H₂O₂）、超氧阴离子（O₂⁻）等自由基的浓度变化。
2. 抗氧化酶活性测定：包括超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GPx）、过氧化氢酶（CAT）及谷胱甘肽（GSH）含量。
3. 脂质过氧化产物检测：如丙二醛（MDA）含量测定，反映细胞膜氧化损伤程度。
4. 抗氧化相关基因表达：通过qRT-PCR或Western blot分析Nrf2、HO-1、SOD1等基因的转录或蛋白表达水平。

检测仪器

1. 流式细胞仪：用于荧光标记的ROS水平检测（如DCFH-DA探针）。
2. 荧光显微镜/酶标仪：观察或定量细胞内的荧光信号强度（如MitoSOX检测线粒体ROS）。
3. 分光光度计：测定SOD、CAT等酶活性和GSH、MDA含量（基于比色法或化学发光法）。
4. 实时定量PCR仪：分析抗氧化基因的mRNA表达水平。
5. 高效液相色谱（HPLC）：用于复杂样本中抗氧化成分的分离与定量。

检测方法

1. 样本处理：

   • 细胞接种于培养板中，暴露于待测物质（如药物或毒素）一定时间后，收集细胞裂解液或直接进行活细胞染色。
   • 抗氧化酶提取需通过离心、超声破碎等步骤获取细胞质或线粒体组分。

2. ROS检测：

   • DCFH-DA染色法：细胞负载荧光探针DCFH-DA，经氧化生成荧光物质DCF，通过流式细胞术或荧光酶标仪检测荧光强度。
   • MitoSOX法：特异性检测线粒体超氧阴离子，荧光信号与ROS水平正相关。

3. 抗氧化酶活性测定：

   • SOD活性：采用黄嘌呤氧化酶法，通过抑制超氧阴离子介导的细胞色素C还原反应计算酶活性。
   • GSH含量：利用DTNB（5,5&39;-二硫代双-2-硝基苯甲酸）显色反应，测定412 nm吸光度。

4. 脂质过氧化检测：

   • 硫代巴比妥酸（TBA）法：MDA与TBA在酸性条件下生成红色复合物，通过比色法测定532 nm吸光度。

5. 基因表达分析：

   • RNA提取后逆转录为cDNA，通过SYBR Green或TaqMan探针进行qRT-PCR，计算抗氧化基因的相对表达量。

6. 数据标准化：所有实验均需设置空白对照、阳性对照（如H₂O₂诱导氧化损伤组），数据以单位蛋白浓度或细胞数量进行归一化处理。

注意：因业务调整，暂不接受个人委托测试望见谅。