活细胞浓度检测

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检测范围 活细胞浓度检测适用于生物医药、细胞培养、发酵工程、组织工程及微生物研究等领域。典型检测样本包括哺乳动物细胞（如HEK293、CHO细胞）、原代细胞、酵母、细菌及藻类悬浮液。检测浓度范围通常为1×10^4至1×10^7 cells/mL，部分高灵敏度仪器可扩展至1×10^3至1×10^8 cells/mL。

检测项目

1. 活细胞浓度：单位体积内具有代谢活性的细胞数量，通常以cells/mL表示。
2. 细胞存活率：活细胞占总细胞（活细胞+死细胞）的比例，以百分比（%）表示。
3. 总细胞浓度（可选）：包含活细胞与死细胞的总数量。

检测仪器

1. 台盼蓝染色结合血球计数板：传统手动检测工具，需配合光学显微镜。
2. 自动细胞计数仪（如CountStar、Luna系列）：基于图像分析或荧光染料（如AO/PI双染）实现快速检测。
3. 流式细胞仪（如BD Accuri、CytoFLEX）：通过荧光标记（如PI、FDA）区分活/死细胞，支持高通量检测。
4. 在线生物反应器监测系统（如Cedex系列、Nova BioProfile）：集成传感器与自动化取样装置，实现实时浓度监测。

检测方法

1. 台盼蓝染色法

   • 步骤： （1）将细胞悬浮液稀释至适宜浓度（通常为1:1-1:10）； （2）与0.4%台盼蓝溶液按体积比1:1混合，静置1-3分钟； （3）取10 μL混合液注入血球计数板，静置1分钟待细胞沉降； （4）显微镜下观察，未染色的透明细胞计为活细胞，蓝色细胞计为死细胞； （5）根据计数公式计算活细胞浓度与存活率。
   • 公式：活细胞浓度（cells/mL）=（四个大方格活细胞总数/4）×稀释倍数×10^4。

2. 自动化细胞计数仪法

   • 步骤： （1）取10-20 μL细胞悬液与荧光染料（如AO/PI）混合； （2）将混合液加入专用计数板或毛细管； （3）仪器自动拍摄图像并分析活/死细胞比例； （4）输出活细胞浓度、存活率及细胞形态参数（如直径、聚团率）。

3. 流式细胞术

   • 步骤： （1）细胞悬液经PI（5 μg/mL）或FDA（0.1 μg/mL）染色，避光孵育5-15分钟； （2）上样至流式细胞仪，设置阈值排除碎片信号； （3）通过前向散射（FSC）和侧向散射（SSC）区分细胞大小及复杂度； （4）结合荧光信号（PI阳性为死细胞，FDA阳性为活细胞）计算存活率及浓度。

4. 在线监测系统

   • 步骤： （1）生物反应器连接无菌取样模块，定时抽取少量培养液； （2）通过阻抗法或光学传感器（如近红外光谱）测定细胞密度； （3）数据实时传输至控制软件，动态调整培养参数（如补料速率、pH）。

注意：因业务调整，暂不接受个人委托测试望见谅。