免疫荧光染色检测

(CMA)     (ISO) (高新技术企业)

检测范围

免疫荧光染色技术广泛应用于生物医学研究及临床诊断领域，适用于细胞、组织切片、器官样本等多种生物材料的检测。该方法主要用于定位和定量分析特定抗原在细胞或组织中的空间分布、表达水平及其动态变化过程，适用于肿瘤学、免疫学、神经科学、病原微生物学等领域的研究。

检测项目

免疫荧光染色检测的核心项目包括：

1. 特定蛋白的定位分析：如细胞骨架蛋白（微管蛋白、肌动蛋白）、细胞膜标志物（CD分子）、核内蛋白（组蛋白、转录因子）等。
2. 细胞结构动态研究：如细胞分裂过程中纺锤体形成、线粒体分布、溶酶体迁移等。
3. 病原体检测：如病毒抗原（流感病毒、新冠病毒）、细菌表面蛋白的定位分析。
4. 信号通路研究：通过共定位分析探究蛋白相互作用或信号分子激活状态。

检测仪器

免疫荧光染色的关键仪器包括：

1. 荧光显微镜：配备不同激发/发射滤光片组的正置或倒置荧光显微镜，用于单色或多色荧光信号观察。
2. 共聚焦激光扫描显微镜（CLSM）：提供高分辨率三维成像，适用于厚样本或亚细胞结构分析。
3. 全自动玻片扫描系统：用于高通量样本的快速成像与分析。
4. 图像分析软件：如ImageJ、Zen、Imaris等，用于荧光强度定量、共定位系数计算及图像后期处理。

检测方法

免疫荧光染色的标准流程如下：

1. 样本制备：
   • 细胞样本：培养细胞经胰酶消化后铺于载玻片或培养皿，密度控制在70%-80%。
   • 组织样本：石蜡切片或冰冻切片厚度为4-10 μm，贴附于防脱载玻片。
2. 固定与透化：
   • 使用4%多聚甲醛或冷丙酮固定10-15分钟，随后以0.1%-0.5% Triton X-100透化5-10分钟。
3. 封闭与抗体孵育：
   • 以5%牛血清白蛋白（BSA）或山羊血清封闭30分钟，减少非特异性结合。
   • 一抗孵育：稀释后的一抗（如1:200-1:1000）室温孵育1小时或4℃过夜。
   • 二抗孵育：荧光标记的二抗（如Alexa Fluor 488/594）避光孵育1小时，稀释比例通常为1:500-1:1000。
4. 复染与封片：
   • 采用DAPI（1 μg/mL）染色细胞核5分钟，PBS冲洗后以抗荧光淬灭剂（如ProLong Gold）封片。
5. 成像与分析：
   • 根据荧光染料特性选择相应滤光片，避免信号串扰；定量分析时需统一曝光参数，确保数据可比性。

注意：因业务调整，暂不接受个人委托测试望见谅。