致泻大肠埃希氏菌检测

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检测范围 致泻大肠埃希氏菌（Diarrheagenic Escherichia coli，DEC）的检测范围主要包括食品、饮用水、环境样本（如污水、土壤）及临床样本（如粪便、呕吐物等）。在食品安全领域，重点关注肉类、乳制品、即食食品、水产品及生鲜果蔬；在临床医学中，主要针对腹泻患者的粪便样本进行检测，以明确病原体类型及感染源。此外，环境监测中需对可能污染水源或食品加工环节的样本进行筛查。

检测项目

1. 致病型鉴定：包括肠致病性大肠埃希氏菌（EPEC）、肠产毒性大肠埃希氏菌（ETEC）、肠侵袭性大肠埃希氏菌（EIEC）、肠出血性大肠埃希氏菌（EHEC）及肠聚集性大肠埃希氏菌（EAEC）的分类检测。
2. 毒力基因检测：针对不同致病型的关键毒力基因，如EHEC的stx1、stx2基因，ETEC的热稳定毒素（ST）和热不稳定毒素（LT）基因，EAEC的aggR基因等。
3. 血清学分型：对O抗原（菌体抗原）和H抗原（鞭毛抗原）进行分型，如EHEC的O157:H7型。
4. 抗生素敏感性试验：评估菌株对常用抗生素的耐药性，指导临床用药。

检测仪器

1. PCR仪：用于毒力基因的扩增和鉴定，包括常规PCR仪及实时荧光定量PCR仪。
2. 全自动微生物鉴定系统：如VITEK 2 Compact或MALDI-TOF质谱仪，用于菌种鉴定及生化特性分析。
3. 电泳仪及凝胶成像系统：用于PCR产物的电泳分离与结果判读。
4. 恒温培养箱及生物安全柜：用于菌株的分离培养及无菌操作。
5. 酶标仪：用于酶联免疫吸附试验（ELISA）检测毒素或抗原。

检测方法

1. 传统分离培养法：

   • 使用选择性培养基（如MAC、SMAC培养基）初步分离大肠埃希氏菌。
   • 通过生化试验（如吲哚试验、乳糖发酵试验）进行初步鉴定。
   • 对疑似菌落进行血清学分型（玻片凝集试验）及毒力基因验证。

2. 分子生物学方法：

   • 多重PCR：设计特异性引物，同时检测多种毒力基因（如stx、eae、ipaH等）。
   • 实时荧光定量PCR：快速定量检测目标基因，灵敏度高，适用于大批量样本筛查。
   • 全基因组测序（WGS）：用于精准分析菌株的基因型、耐药基因及进化关系。

3. 免疫学方法：

   • ELISA：检测样本中特定毒素（如志贺毒素）或菌体抗原。
   • 免疫磁珠分离技术（IMS）：富集目标菌株，提高检测灵敏度。

4. 药敏试验：

   • 采用Kirby-Bauer纸片扩散法或微量肉汤稀释法，测定菌株对β-内酰胺类、喹诺酮类等抗生素的敏感性。

注意：因业务调整，暂不接受个人委托测试望见谅。