透析液细菌检测

(CMA)     (ISO) (高新技术企业)

透析液细菌检测技术规范

一、检测范围 透析液细菌检测主要针对医疗机构血液透析中心使用的透析液、透析用水及其制备系统。检测对象包括：

1. 单次使用前的透析液成品；
2. 透析机内部循环的透析液；
3. 反渗水系统（RO水）及分配管道；
4. 透析液配制过程中涉及的储液罐、输送管路等关键节点。 检测频率依据《血液净化标准操作规程》，常规监测每月一次，高风险环节可增加至每周一次。

二、检测项目

1. 细菌总数：评估每毫升透析液或透析用水中需氧菌及兼性厌氧菌的活菌数，标准限值为≤100 CFU/mL（透析液）及≤0.25 EU/mL内毒素（透析用水）。
2. 内毒素（Endotoxin）：检测革兰氏阴性菌细胞壁脂多糖（LPS），限值需符合ISO 23500标准。
3. 特定病原菌筛查：包括铜绿假单胞菌、大肠埃希氏菌、金黄色葡萄球菌等高风险致病菌。
4. 水质相关参数：电导率、pH值、总氯及过氧化物残留量，确保透析液配制水源符合YY 0572-2015要求。

三、检测仪器

1. 微生物培养设备：恒温培养箱（35–37°C用于细菌总数，20–25°C用于真菌及特殊菌种）。
2. 菌落计数仪：全自动菌落分析系统（如ProtoCOL 3）或传统平板计数法。
3. 内毒素检测仪：动态显色法鲎试剂配套分光光度计（如Endosafe PTS）或凝胶法检测装置。
4. 分子生物学设备：实时荧光定量PCR仪（用于快速检测特定病原菌核酸）。
5. 水质分析仪：便携式电导率计、高精度pH计及余氯检测试纸。

四、检测方法

1. 微生物培养法

   • 取样：无菌操作采集透析液100 mL，通过0.45 μm滤膜富集微生物，滤膜置于R2A琼脂培养基。
   • 培养：35°C恒温培养7天，计算菌落形成单位（CFU）。
   • 鉴定：可疑菌落进一步通过革兰氏染色、API生化试验或MALDI-TOF质谱鉴定。

2. 内毒素检测

   • 动态显色法：样本与鲎试剂（LAL）反应，通过分光光度计检测吸光度变化，定量内毒素浓度。
   • 凝胶法：观察样本与鲎试剂混合后的凝胶形成，判定内毒素是否超标。

3. 分子生物学检测

   • 核酸提取：采用磁珠法从透析液中提取细菌DNA/RNA。
   • 荧光定量PCR：针对16S rRNA基因或特定毒力基因（如铜绿假单胞菌的lasB基因）进行扩增，实现2–4小时内快速定性/半定量分析。

4. 水质快速检测

   • 电导率：直接读取数值，确保反渗水电导率≤50 μS/cm（25°C）。
   • 总氯残留：DPD比色法，限值≤0.1 mg/L。

5. 病原菌专项鉴定

   • 选择性培养基：如Cetrimide琼脂筛选铜绿假单胞菌，MacConkey琼脂分离肠杆菌科细菌。
   • 药敏试验：对阳性样本进行抗生素敏感性分析，指导临床干预。

依据标准：GB 15982-2012《医院消毒卫生标准》、ISO 23500-2014《血液透析及相关治疗用水处理设备》。

注意：因业务调整，暂不接受个人委托测试望见谅。