胃蛋白酶效价检测

(CMA)     (ISO) (高新技术企业)

检测范围

胃蛋白酶效价检测适用于药品、食品及生物制品等领域。在药品生产中，该检测用于消化酶类药物的质量控制；在食品工业中，用于含胃蛋白酶的保健食品或添加剂活性评估；在生物技术领域，应用于酶学特性研究、工艺优化及稳定性测试；此外，诊断试剂的开发与验证亦需通过效价检测确保性能。

检测项目

1. 酶活性测定：量化单位时间内胃蛋白酶对特定底物（如酪蛋白）的分解能力。
2. 底物特异性分析：评估酶对不同底物（如血红蛋白、胶原蛋白）的催化效率差异。
3. pH依赖性测试：检测酶在pH 1.5-3.5范围内的活性变化，确定最适反应条件。
4. 温度稳定性评估：分析酶在25-50℃下的活性保留率，验证储存或使用条件下的稳定性。
5. 抑制剂/激活剂影响：探究金属离子（如Ca²⁺、Zn²⁺）或化合物对酶活性的促进或抑制效应。

检测仪器

1. 分光光度计：测定底物分解产物的吸光度值（常用波长280nm）。
2. 恒温水浴槽：维持反应体系温度（如37℃±0.5℃）。
3. pH计：精确校准反应液的酸碱度（如pH 2.0盐酸缓冲液）。
4. 离心机：分离样品中的不溶物质（通常设定3000-10000rpm）。
5. 电子天平与微量移液器：精确称量试剂与分配液体（精度达0.1mg/1μL）。
6. 酶标仪（可选）：用于高通量样本的快速检测。

检测方法

1. 底物制备：将酪蛋白溶于pH 2.0盐酸缓冲液，配制成0.5%-1.0%浓度，37℃预温育。
2. 样品处理：待测酶样品用缓冲液溶解，离心（10000rpm, 5分钟）取上清液，梯度稀释至适宜浓度。
3. 反应体系：取酶液与底物按比例混合，37℃孵育10分钟，立即加入10%三氯乙酸终止反应。
4. 吸光度测定：离心去除沉淀后，取上清液于280nm处测定吸光度，空白对照为未孵育即终止的样本。
5. 效价计算：根据标准曲线（酪氨酸浓度-吸光度）将吸光值转换为产物生成量，按公式计算酶活性单位（U/mg）： 效价=Δ�×�总×��×�×�效价=t×ε×mΔA×V总​×D​ 其中，Δ�ΔA为吸光度变化值，�总V总​为反应体积，�D为稀释倍数，�t为反应时间（min），�ε为酪氨酸摩尔消光系数，�m为酶样品质量（mg）。
6. 重复性与统计：每组实验平行测定3次，取均值并计算相对标准偏差（RSD），确保结果可靠性。

注意：因业务调整，暂不接受个人委托测试望见谅。