反竞争性抑制类型检测

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信息概要

反竞争性抑制类型检测是针对酶动力学研究中特定抑制机制的分析服务。该检测旨在识别和量化抑制剂与酶-底物复合物结合、降低酶最大反应速率而不影响米氏常数的反竞争性抑制行为。检测的重要性在于其为药物开发、毒理学评估及酶功能研究提供关键数据，帮助优化抑制剂设计并理解生物代谢通路调控机制。

检测项目

抑制常数Ki测定, 最大反应速率Vmax变化分析, 米氏常数Km稳定性验证, 底物浓度梯度测试, 抑制剂浓度效应曲线, 酶活性保留率, 结合亲和力评估, 动力学参数拟合, 线性回归分析, 抑制类型判定, 反应初速度测量, 热稳定性影响, pH依赖性测试, 时间进程曲线, 可逆性验证, 选择性指数计算, 竞争性抑制排除, 非竞争性抑制对比, 酶饱和度实验, 荧光猝灭检测

检测范围

药物候选分子, 天然产物提取物, 化学合成抑制剂, 酶突变体, 蛋白质复合物, 细胞裂解液, 血清样本, 组织匀浆, 微生物酶制剂, 工业用酶, 诊断试剂酶, 抗氧化酶, 水解酶类, 激酶, 磷酸酶, 脱氢酶, 蛋白酶, 核酸酶, 连接酶, 异构酶

检测方法

Lineweaver-Burk双倒数作图法：通过线性变换动力学数据区分抑制类型。

Dixon绘图法：利用抑制剂浓度与反应速率关系确定Ki值。

酶动力学实时监测：使用分光光度计连续追踪反应进程。

等温滴定量热法：直接测量结合过程中的热变化。

表面等离子共振技术：实时分析分子间相互作用动力学。

荧光偏振检测：通过荧光信号变化评估结合特性。

停流光谱法：用于快速反应动力学的毫秒级测量。

高效液相色谱法：分离并定量反应产物。

质谱分析法：鉴定酶-抑制剂复合物的化学结构。

圆二色谱法：分析抑制剂结合引起的构象变化。

核磁共振波谱法：在原子水平解析结合位点。

微量热泳动技术：通过温度梯度测量结合亲和力。

酶联免疫吸附试验：适用于高通量抑制剂筛选。

分子对接模拟：计算机辅助预测抑制机制。

放射性配体结合 assay：使用标记配体精确量化结合。

检测仪器

紫外-可见分光光度计, 荧光光谱仪, 等温滴定量热仪, 表面等离子共振仪, 高效液相色谱仪, 质谱仪, 圆二色光谱仪, 核磁共振仪, 微量热泳动仪, 酶标仪, 停流装置, 液相色谱-质谱联用仪, 恒温摇床, pH计, 离心机

问：反竞争性抑制检测在药物研发中有什么具体应用？ 答：该检测可用于筛选特异性抑制剂，帮助设计靶向酶-底物复合物的药物，提高疗效并减少副作用。

问：如何区分反竞争性抑制与其他抑制类型？ 答：通过Lineweaver-Burk作图分析，反竞争性抑制会呈现一组平行线，而竞争性抑制线条相交于y轴，非竞争性抑制相交于x轴。

问：检测反竞争性抑制时对样品有何要求？ 答：样品需包含纯化的酶、特定底物及待测抑制剂，并控制pH、温度等条件以确保动力学数据的准确性。

注意：因业务调整，暂不接受个人委托测试望见谅。