数字PCR绝对定量测试

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信息概要

数字PCR绝对定量测试是一种先进的核酸定量技术，通过将样品分割成数千个微滴或微孔，进行独立的PCR扩增，从而实现对目标DNA或RNA分子的绝对计数。该技术不依赖标准曲线，直接提供拷贝数浓度，具有高灵敏度、高精度和抗抑制剂能力强的优势。检测的重要性在于其在低丰度突变检测、基因表达分析、病原体载量监测和转基因成分定量等领域的应用，可确保结果的准确性和可重复性，为临床诊断、生物研究和食品安全提供可靠数据。

检测项目

目标基因拷贝数, 突变等位基因频率, 病原体载量, 基因表达水平, 微生物丰度, 转基因成分含量, 病毒滴度, 单细胞基因表达, 拷贝数变异, 融合基因检测, miRNA定量, 甲基化水平, 病原体分型, 药物残留DNA, 环境DNA定量, 细胞游离DNA浓度, 细菌负荷, 疫苗效价评估, 基因编辑效率, 稀有突变检测

检测范围

临床血液样本, 组织切片, 细胞培养物, 环境水样, 食品样本, 植物组织, 动物组织, 微生物培养物, 病毒分离物, 唾液样本, 尿液样本, 粪便样本, 土壤样本, 空气样本, 药品制剂, 化妆品样品, 转基因作物, 法医物证, 海洋生物样本, 工业发酵产品

检测方法

微滴式数字PCR法: 通过油包水乳化技术将反应体系分割成纳升级微滴进行PCR扩增。

芯片式数字PCR法: 利用微流控芯片将样品分配到数千个独立反应室中实现定量。

终点荧光检测法: 在PCR结束后检测每个微滴的荧光信号判断阴阳性。

绝对定量计算法: 基于泊松分布统计阳性微滴比例计算目标分子拷贝数。

多重数字PCR法: 同时检测多个靶标使用不同荧光探针进行区分。

微滴生成优化法: 优化表面活性剂浓度和油相比例确保微滴均匀稳定。

模板稀释系列法: 通过系列稀释验证检测的线性范围和灵敏度。

抑制物评估法: 添加内参基因评估样品中抑制物对扩增效率的影响。

温度梯度优化法: 优化退火温度提高扩增特异性和效率。

数据分析软件法: 使用专用软件自动识别微滴群和计算浓度。

质量控制样品法: 包含阳性和阴性对照确保实验过程可靠。

微滴计数校准法: 使用标准微球校准微滴生成数量和体积。

荧光阈值设定法: 基于阴性对照分布设定荧光信号判断阈值。

重复实验验证法: 进行技术重复评估结果的再现性。

样本前处理法: 采用DNA/RNA提取纯化步骤去除干扰物质。

检测仪器

微滴式数字PCR系统, 芯片式数字PCR仪, 微滴生成仪, 微滴分析仪, 荧光PCR仪, 微流控芯片阅读器, 核酸提取仪, 离心机, 涡旋混合器, 微量分光光度计, 恒温水浴锅, 生物安全柜, 超低温冰箱, 移液器, 数据分析工作站

问：数字PCR绝对定量测试与实时荧光定量PCR的主要区别是什么？ 答：数字PCR不依赖标准曲线，通过直接计数实现绝对定量，而qPCR需要标准品制作标准曲线进行相对定量；数字PCR具有更高的精度和抗干扰能力，特别适合低丰度样本检测。 问：在临床应用中，数字PCR绝对定量测试常用于哪些疾病的诊断？ 答：主要用于癌症基因突变检测（如EGFR、KRAS突变）、传染病病原体载量监测（如HIV、HBV病毒载量）、产前遗传病筛查和移植后排斥反应监控等领域。 问：数字PCR测试对样本质量有什么特殊要求？ 答：样本需要保证核酸完整性，避免严重降解；虽然数字PCR抗抑制剂能力较强，但仍需控制样本中血红蛋白、肝素等常见抑制剂的含量，建议使用纯化后的高质量核酸样本。

注意：因业务调整，暂不接受个人委托测试望见谅。