基因敲除效率检测

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信息概要

基因敲除效率检测是通过分子生物学技术评估特定基因在细胞或生物体中被成功敲除的比例和效果。该检测对于基因功能研究、疾病模型构建、基因治疗开发及药物筛选至关重要。高效的基因敲除能确保实验结果的可靠性，避免脱靶效应带来的假阳性或假阴性结论，是生命科学研究和生物技术应用中的关键质量控制环节。

检测项目

敲除效率百分比，基因表达水平，蛋白表达量，DNA序列验证，脱靶效应分析，细胞存活率，插入/缺失突变频率，同源重组效率，CRISPR/Cas9活性，sgRNA效率，PCR扩增验证，Western Blot检测，流式细胞术分析，测序深度覆盖度，突变类型鉴定，拷贝数变异，细胞克隆形成率，mRNA丰度，功能表型评估，生物信息学分析

检测范围

人类细胞系，小鼠模型，植物组织，细菌培养物，酵母菌株，昆虫细胞，鱼类胚胎，哺乳动物组织，干细胞，原代细胞，基因编辑动物，肿瘤细胞，微生物群落，病毒载体，转基因生物，器官类器官，血液样本，组织切片，环境样品，临床样本

检测方法

实时荧光定量PCR（qPCR）：通过荧光信号定量检测基因表达水平变化。

Western Blot：利用抗体检测目标蛋白的表达量以间接评估敲除效果。

Sanger测序：直接对基因序列进行测序验证敲除位点的突变情况。

下一代测序（NGS）：高通量测序分析全基因组范围内的敲除效率和脱靶效应。

T7E1酶切法：通过酶切错配DNA快速检测基因编辑产生的突变。

流式细胞术：基于荧光标记分析细胞群体中基因敲除的百分比。

数字PCR：绝对定量DNA拷贝数以精确计算敲除效率。

免疫组织化学：在组织水平可视化蛋白表达缺失。

Southern Blot：检测DNA片段大小变化以确认基因敲除。

CRISPR活性检测：评估CRISPR系统的切割效率和特异性。

细胞活力测定：通过MTT或CCK-8法分析敲除对细胞存活的影响。

基因芯片：高通量筛查多个基因的表达谱变化。

原位杂交：定位mRNA表达以验证敲除的空间效果。

酶联免疫吸附试验（ELISA）：定量检测特定蛋白产物的浓度。

生物发光共振能量转移（BRET）：实时监测蛋白相互作用变化。

检测仪器

实时荧光定量PCR仪，Western Blot成像系统，DNA测序仪，流式细胞仪，显微成像系统，酶标仪，电泳仪，离心机，核酸提取仪，凝胶成像系统，生物分析仪，分光光度计，细胞培养箱，超低温冰箱，振荡器

问：基因敲除效率检测通常使用哪些样本类型？答：常见样本包括人类或动物细胞系、转基因模型的组织、以及临床分离的血液或组织样本，需根据研究目的选择。

问：如何减少基因敲除检测中的脱靶效应误差？答：可通过优化sgRNA设计、使用高保真CRISPR系统、并结合NGS进行全基因组脱靶扫描来提高准确性。

问：基因敲除效率检测在药物开发中有什么应用？答：它用于验证药物靶点的有效性，例如通过敲除疾病相关基因评估化合物疗效，加速临床前研究。

注意：因业务调整，暂不接受个人委托测试望见谅。