细胞裂解液总蛋白浓度Bradford法测试

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信息概要

细胞裂解液总蛋白浓度检测是生物学实验中测定蛋白质含量的关键步骤，使用Bradford法进行测试。该方法基于蛋白质与染料结合后吸光度的变化来定量，操作简便、灵敏度高、特异性强。检测的重要性在于确保实验数据的准确性，常用于细胞生物学、生物化学等领域，以评估样本质量、标准化上样量或监控蛋白质提取效率。概括来说，该检测提供快速可靠的蛋白质浓度数据，支持下游应用如Western blot、ELISA或酶活性分析。

检测项目

总蛋白浓度, Bradford标准曲线线性范围, 吸光度测量, 蛋白质回收率, 样品稀释倍数, 缓冲液干扰评估, 重复性测试, 准确度验证, 精密度分析, 检测限确定, 定量限评估, 样品稳定性检查, 染料结合效率, 背景吸光度校正, 温度影响分析, pH依赖性测试, 干扰物质筛查, 蛋白质类型特异性, 样本均匀性验证, 方法比对研究

检测范围

动物细胞裂解液, 植物细胞裂解液, 细菌裂解液, 酵母裂解液, 组织匀浆液, 血清样本, 尿液样本, 培养上清液, 重组蛋白溶液, 抗体溶液, 酶提取液, 病毒裂解液, 线粒体提取物, 核提取物, 胞浆组分, 膜蛋白提取液, 全血裂解液, 脑脊液样本, 乳汁样本, 环境微生物裂解液

检测方法

Bradford法：基于考马斯亮蓝染料与蛋白质结合产生颜色变化，通过分光光度计测量595nm吸光度。

BCA法：利用双辛可宁酸在碱性条件下与蛋白质还原铜离子反应，测量562nm吸光度。

Lowry法：通过蛋白质的酪氨酸和色氨酸与Folin-酚试剂反应，测量750nm吸光度。

紫外吸收法：直接测量蛋白质在280nm的紫外吸光度，基于芳香族氨基酸含量。

荧光法：使用荧光染料如NanoOrange标记蛋白质，通过荧光读数定量。

浊度法：基于蛋白质沉淀产生的浊度变化进行半定量分析。

ELISA法：采用酶联免疫吸附测定针对特定蛋白质的浓度。

Western blot半定量法：通过电泳和印迹后密度计量化。

质谱法：使用质谱仪进行高精度蛋白质定量和鉴定。

红外光谱法：分析蛋白质的酰胺键吸收进行定量。

折射率法：通过测量样品折射率变化间接估算浓度。

胶体金法：基于纳米金颗粒与蛋白质结合的比色检测。

电化学法：利用蛋白质的电化学特性进行传感检测。

毛细管电泳法：通过电泳分离后紫外检测定量。

动态光散射法：测量蛋白质粒径分布间接反映浓度。

检测仪器

分光光度计, 酶标仪, 微量移液器, 离心机, 涡旋混合器, 水浴锅, 天平, pH计, 冰箱, 超净工作台, 蛋白质定量试剂盒, 比色皿, 多孔板, 光谱分析软件, 数据记录仪

Bradford法测试细胞裂解液总蛋白浓度时，为什么需要制作标准曲线？标准曲线用于将样品的吸光度值转换为蛋白质浓度，通过已知浓度的标准品建立线性关系，确保定量准确性。

细胞裂解液中的哪些成分可能干扰Bradford法检测？去垢剂、还原剂、高盐浓度或脂质等成分可能影响染料结合，导致结果偏差，需通过稀释或对照实验校正。

如何优化Bradford法以提高细胞裂解液蛋白质检测的重复性？优化包括严格控制反应时间、温度、染料新鲜度，以及使用同一批试剂和仪器校准，同时进行多次重复测量取平均值。

注意：因业务调整，暂不接受个人委托测试望见谅。